介绍一种用于体液微量核酸提取的纯化柱的制作方法

本站介绍的介绍一种用于体液微量核酸提取的纯化柱的制作方法,小编带大家了解一下 。

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一种用于体液微量核酸提取的纯化柱的制作方法

[0001]本实用新型属于体液微量微小核酸提取领域,尤其是涉及一种用于体液中含量极微的微小核酸的提取装置结构的改进。

[0002]RNA是最重要的生物信息分子之一,是分子生物学研究的一个重要组成部分,不论是cDNA文库的构建、RT-PCR、RNA序列分析、Northern印迹分析、蛋白质的体外翻译等均依赖于高纯度完整RNA。因此,如何获得高质量的RNA是研究人员关注的问题。
[0003]RNA提取的通用方法为异硫氰酸胍/苯酚法,其原理是细胞在变性剂异硫氰酸胍的作用下被裂解,同时核蛋白体上的蛋白变性,核酸释放;释放出来的DNA和RNA由于在特定pH条件下溶解度的不同而分别位于整个体系的中间相和水相,从而得到分离;有机溶剂抽提,沉淀,得到纯净DNA和RNA。因此,由上述成份组成的RNA快速提取试剂构成获得高纯度完整RNA的基础。
[0004]目前,市场上涌现出大量商品化的基于以上原理的RNA提取试剂盒。以纯化柱为例,一般包括裂解液、漂洗液、洗柱液、去RNA酶水、去RNA酶吸附柱和去RNA酶收集管。高效、专一结合RNA的离心吸附柱和独特的缓冲系统,可从多种不同类型的微量样品中快速提取总RNA。
[0005]RNA快速提取方法简化了传统一步法的操作程序,去掉了变性液复溶和异丙醇再次沉淀的步骤,这不但使操作简化,而且使RNA丢失减少,回收率增加,同时使RNA的提取周期由原来的4 h缩短至1 h,这不但节省了时间,提高了工作效率,而且减少了 RNA降解的机会。并且柱式的洗涤具有“流水洗涤”的效果,柱式中的RNA不形成团块;在小分子物(盐等)的去除方面,离心后柱子中残留的液体少。
[0006]尽管RNA纯化柱具有以上诸多优点,但也存在一定的不足。就是通过上述手段提取到微小RNA之后,使用常规的核酸与蛋白检测设备(比如Nanodrop)等甚至检测不到经典的核酸吸光度峰值(260nm处的吸收峰),检测得到值通常仅为〈1 Ong/u 1。各大公司和研究机构一直无法解释其原因,仍在更换不同的化学试剂、增加起始样本量方面进行研究、改进,以期望能够解决上述问题;但效果不佳。
[0007]我方在实验、研究过程中发现,响到RNA的纯度的根本原因在于:常规核酸纯化柱中压盖固定核酸吸附膜的断面为正方形的环状压圈(如图1、图2)的构造缺陷,几乎总会导致有部分核酸提取过程中的洗脱试剂在压圈上表面上残留。残留的洗脱液会造成230-280nm波长方位内样品的整体吸光度抬升,掩盖掉本就检测值很低的核酸的浓度,甚至仅能看到洗脱液的光度吸收曲线,而核酸的吸收峰完全被掩盖掉。更为严重的是,残留的洗脱试剂含有各种化学物质,在进行后续多聚酶链扩增反应(PCR)时,这些试剂会影响到PCR反应的效率,甚至导致失败。在microRNA提取已经较为普遍的近些年,该洗脱液残留导致的实验失败仍然在影响着世界范围内的广大研究者,使得多数研究者只能转而去研究microRNA含量丰富的细胞、组织。虽然越来越多的公司生成开发出能够成功进行体液中miRNA检测的试剂盒,然而在实际使用过程中,仍然存在检出率低,扩增得到的miRNA的丰度不够高的现象。虽然可通过在最后核酸洗脱前使用移液器小心移除残留洗脱液,能够使血清中微量核酸的种类检出率提高一倍,含量(拷贝数)甚至可以增加2的5次方,约30多倍。但此措施导致实验步骤繁琐,浪费耗材。
[0008]但截至目前,各大公司和研究机构仍没有注意到对于微量microRNA提取,造成实验结果不好的原因就在于该环状压圈,目前国内外所有公司生产的提取柱仍然一直在使用原有结构。



[0009]本实用新型就是针对上述问题,提供一种可提高RNA纯度的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱。
[0010]为实现本实用新型的上述目的,本实用新型采用如下技术方案,一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,包括外壳,在外壳内侧下部设有过滤层,在过滤层上方设有环状压圈,其特征在于:所述环状压圈的外沿上端与内沿下端之间构成外高内低的倾斜面。
[0011]作为一种优选方案,所述的环状压圈的外沿上端与内沿下端之间构成倾斜平面。
[0012]作为另一种优选方案,所述的环状压圈的外沿上端与内沿下端之间构成向下凹陷的弧面。
[0013]作为又一种优选方案,在外壳下端设有排液管;洗脱试剂等液体从排液管排出。
[0014]作为又一种优选方案,所述的过滤层为筛板或滤纸。
[0015]作为又一种优选方案,所述的外壳为柱状塑料外壳。
[0016]本实用新型的有益效果。
[0017]本实用新型通过将断面为矩形的环状压圈、改进为外沿上端与内沿下端之间构成倾斜面的压圈的方式,彻底解决离心过程中洗脱液残留的现象,极大造福科研领域,解决了研究人员一直渴望解决但始终未能获得成功的技术难题。另外,本实用新型结构简单,但由于处于非常专业的领域,非常难找到造成提取RNA过程中残留洗脱液的原因。因此,本实用新型对全世界微量核酸提取产品和科研结果的产出,经济效益与现实意义均不可小觑。

[0018]图1是现有纯化柱结构示意图。
[0019]图2是图1的剖视图。
[0020]图3是本实用新型环状压圈的外沿上端与内沿下端之间构成倾斜平面的结构示意图。
[0021]图4是本实用新型环状压圈的外沿上端与内沿下端之间构成向下凹陷的弧面的结构示意图。
[0022]图中,1为环状压圈、2为外壳、3为过滤层、4为排液管。

[0023]实施例1。
[0024]如图3所示,一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,包括外壳2,在外壳2内侧下部设有过滤层3,在过滤层3上方设有环状压圈1,其特征在于:所述的环状压圈1的外沿上端与内沿下端之间构成倾斜平面;在外壳2下端设有排液管4 ;洗脱试剂等液体从排液管排出。
[0025]所述的过滤层3为筛板或滤纸。
[0026]所述的外壳2为柱状塑料外壳。
[0027]实施例2。
[0028]如图4所不,一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,包括外壳2,在外壳2内侧下部设有过滤层3,在过滤层3上方设有环状压圈1,其特征在于:所述的环状压圈1的外沿上端与内沿下端之间构成向下凹陷的弧面;在外壳2下端设有排液管4 ;洗脱试剂等液体从排液管排出。
[0029]所述的过滤层3为筛板或滤纸。
[0030]所述的外壳2为柱状塑料外壳。

1.一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,包括外壳(2),在外壳(2)内侧下部设有过滤层(3),在过滤层(3)上方设有环状压圈(1),其特征在于:所述环状压圈(1)的外沿上端与内沿下端之间构成外高内低的倾斜面。2.根据权利要求1所述的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,其特征在于:所述的环状压圈(1)的外沿上端与内沿下端之间构成倾斜平面。3.根据权利要求1所述的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,其特征在于:所述的环状压圈(1)的外沿上端与内沿下端之间构成向下凹陷的弧面。4.根据权利要求1所述的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,其特征在于:在外壳(2)下端设有排液管(4)。5.根据权利要求1所述的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,其特征在于:所述的过滤层(3)为筛板。6.根据权利要求1所述的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,其特征在于:所述的过滤层(3)为滤纸。7.根据权利要求1所述的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,其特征在于:所述的外壳(2)为柱状塑料外壳。
一种用于体液微量核酸提取的纯化柱属于体液微量微小核酸提取领域,尤其是涉及一种用于体液中含量极微的微小核酸的提取装置结构的改进。本实用新型提供一种可提高RNA纯度的一种用于体液微量核酸提取的纯化柱。一种用于体液微量核酸提取的纯化柱,包括外壳,在外壳内侧下部设有过滤层,在过滤层上方设有环状压圈,其特征在于:所述环状压圈的外沿上端与内沿下端之间构成外高内低的倾斜面。
C12N15/10, C12M1/12
CN205133629
CN201520655921
李晓东, 曾宪东, 唐娟, 张铎, 郑恒, 董淑英
沈阳医学院附属中心医院
2016年4月6日
2015年8月28日

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