介绍SARS

本站提供的介绍SARS,为您描述接下来的东西: 本发明属于细胞免疫学领域,具体涉及一种针对sars-cov-2的中和抗体及其应用。

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本发明属于细胞免疫学领域,具体涉及一种针对sars-cov-2的中和抗体及其应用。



背景技术:

新型冠状病毒肺炎(coronavirusdisease2019,covid-19),简称“新冠肺炎”,是由sars-cov-2病毒感染导致的肺炎,呼吸道飞沫传播是主要传播途径,在相对封闭的环境中长时间暴露于高浓度气溶胶情况下存在经气溶胶传播的可能,其他传播途径尚待明确;人群普遍易感,潜伏期1~14d,一般为3~7d。临床类型包括无症状感染者、轻型、普通型、重型和危重型,老年及有基础疾病病例预后较差,儿童病例症状相对较轻。截至2020年2月27日11时,全国累计报告确诊病例78630例,累计死亡病例2747例;目前,日本、韩国、伊朗、意大利、美国等也有病案报道,covid-19已对全球人类健康构成了严重威胁。

新型冠状病毒肺炎的病原sars-cov-2为冠状病毒科β病毒属,是线性正链rna病毒,研究发现,sars-cov-2在进化树的位置上,与sars-cov、类sars-cov的类群相邻,新型冠状病毒有4种主要的结构蛋白:刺突蛋白(spikeprotein,s蛋白),核衣壳蛋白(nucleocapsid,n蛋白),膜蛋白(membraneprotein,m蛋白),包膜蛋白(envelopeprotein,e蛋白)。s蛋白含有两个亚基,s1和s2,s1包括n-末端域和c-末端rbd域。s-rbd与人ace2互作进而感染人的呼吸道上皮细胞,对于病毒感染起到重要作用,是宿主中和抗体的重要作用位点以及疫苗设计的关键靶点。covid-19传播迅速、疫情紧急,目前尚无有效的疫苗用于预防,人感染了sars-cov-2,亦无特效药用于临床,主要以对症治疗为主。而作为疫苗和化学治疗的补充,由抗体介导的预防和治疗病毒感染的措施已显现良好的效果,其应用前景得到专家的认同。目前已经有将covid-19患者康复后的血浆,输注给重症病人实现治愈的成功案例。但多抗血浆不仅来源有限,同时其临床应用也受到诸如难以质控、供受体血型不匹配、潜在的传染性因子等条件的限制,而人源单克隆抗体可有效克服上述问题。

本专利采用噬菌体展示技术,构建了一个高容量的人源免疫性噬菌体抗体文库,并以sars-cov-2-s蛋白为靶标,筛选人源抗体单链抗体片段(singlechainvariablefragment,scfv),获得几种人源scfv抗体分子。进一步的实验研究表明,该单抗对sars-cov-2病毒有较强的中和作用,本申请为新冠肺炎的免疫治疗提供候选抗体,具有重要的临床应用价值。



技术实现要素:

本发明的目的在于提供sars-cov-2病毒的中和抗体或其抗原结合片段,所述抗体或其抗原结合片段以病毒的sars-cov-2-s蛋白为靶标,sars-cov-2-s蛋白的序列为seqidno.1。

进一步,所述中和抗体或其抗原结合片段包括轻链cdr1、轻链cdr2、轻链cdr3、重链cdr1、重链cdr2和重链cdr3;

重链cdr1的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.2、seqidno.3、seqidno.4或seqidno.5;

重链cdr2的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.6、seqidno.7、seqidno.8或seqidno.9;

重链cdr3的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.10、seqidno.11、seqidno.12或seqidno.13;

轻链cdr1的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.14、seqidno.15、seqidno.16或seqidno.17;

轻链cdr2的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.18、seqidno.19、seqidno.20或seqidno.21;

轻链cdr3的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.22、seqidno.23、seqidno.24或seqidno.25。

优选地,重链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.2、seqidno.6、seqidno.10,轻链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.14、seqidno.18、seqidno.22;

或重链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.3、seqidno.7、seqidno.11,轻链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.15、seqidno.19、seqidno.23;

或重链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.4、seqidno.8、seqidno.12,轻链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.16、seqidno.20、seqidno.24;

或重链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.5、seqidno.9、seqidno.13,轻链cdr1、cdr2、cdr3的氨基酸序列分别为seqidno.17、seqidno.21、seqidno.25。

进一步,所述中和抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.26、seqidno.28、seqidno.30或seqidno.32;轻链可变区的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.27、seqidno.29、seqidno.31或seqidno.33。

优选的,所述中和抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列为seqidno.26,轻链可变区的氨基酸序列seqidno.27;或中和抗体的重链可变区的氨基酸序列为seqidno.28,轻链可变区的氨基酸序列seqidno.29;中和抗体的重链可变区的氨基酸序列为seqidno.30,轻链可变区的氨基酸序列seqidno.31;中和抗体的重链可变区的氨基酸序列为seqidno.32,轻链可变区的氨基酸序列seqidno.33。

本发明还包括抗体氨基酸序列的保守序列变体的抗体也包括在本发明的范围之内。保守氨基酸序列变体包括不显著改变本发明的中和抗体性质的氨基酸序列的修饰,如源于本领域熟知的相似氨基酸替代的变体,氨基酸的缺失、增加导致的变体。

本发明的中和抗体还包括人源与非人源抗体,以及具有与上述中和抗体相同功能或改造及优化的一切抗体。

进一步,所述中和抗体的抗原结合片段包括fab、fab′、f(ab′)2、fv或单链抗体。

fab是指含有一条轻链的可变区和恒定区和一条重链的可变区和恒定区经二硫键结合起来的抗体分子的一部分。

fab’是指包含了部分铰链区的fab片段。

f(ab’)2指的是fab’的二聚体。

fv指的是含有抗体重链可变区、轻链可变区并具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。

单链抗体指的是由轻链可变区与重链可变区直接相连或通过一个肽链连接而成的工程抗体。

本发明的公开的中和抗体可以在重链和轻链可变区包含一个或多个糖基化位点,如本领域内熟知的,在可变区中存在的一个或多个糖基化位点可以导致增强的抗体免疫原性,或者由于改变了抗原结合而改变抗体的药物动力学。

本发明的中和抗体可以被设计为在fc区域内包含修改,通常是改变抗体的1个或多个功能特性,如血清半衰期、补体结合、fc受体结合、和/或抗原依赖的细胞毒性。此外,本发明的抗体可以被化学修饰(如,可以将一个或多个化学基团连接于抗体),或被修饰以改变其糖基化,从而再改变抗体的一个或多个功能特性。

本发明的中和抗体可以被设计的另一个修饰是聚乙二醇化。抗体可被聚乙二醇化,从而,例如,增加抗体的生物(如血清)半衰期。为了使抗体聚乙二醇化,该抗体或其片段通常在适合于一个或多个聚乙二醇(peg)基团连接到该抗体或抗体片段的条件下,与peg反应,如聚乙二醇的活性酯或醛衍生物。优选地,该聚乙二醇化是通过与活性的peg分子(或类似的活性水溶性聚合物)进行酰化反应或烷基化反应而实现。

本发明还提供了编码前面所述的中和抗体或其抗原结合片段的核酸分子,所述核酸分子包括编码中和抗体轻链可变区的核苷酸序列,编码中和抗体重链可变区的核苷酸序列,编码中和抗体重链的核苷酸序列,或编码中和抗体轻链的核苷酸序列。

本发明的编码前面所述的中和抗体或其抗原结合片段的核酸分子包括具有优选的核苷酸序列的保守核苷酸序列变体的核酸分子。所谓的保守核苷酸序列变体源于遗传密码简并和沉默的变体,核苷酸的替代、缺失和增加也包含在内。

具体的,编码重链cdr1的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.34、seqidno.35、seqidno.36或seqidno.37;

编码重链cdr2的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.38、seqidno.39、seqidno.40或seqidno.41;

编码重链cdr3的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.42、seqidno.43、seqidno.44或seqidno.45;

编码轻链cdr1的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.54、seqidno.55、seqidno.56或seqidno.57;

编码轻链cdr2的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.58、seqidno.59、seqidno.60或seqidno.61;

编码轻链cdr3的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.62、seqidno.63、seqidno.64或seqidno.65。

优选地,编码重链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.34、seqidno.38、seqidno.42,编码轻链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.54、seqidno.58、seqidno.62;

或编码重链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.35、seqidno.39、seqidno.43,编码轻链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.55、seqidno.59、seqidno.63;

或编码重链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.36、seqidno.40、seqidno.44,编码轻链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.56、seqidno.60、seqidno.64;

或编码重链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.37、seqidno.41、seqidno.45,编码轻链cdr1、cdr2、cdr3的核酸序列分别为seqidno.57、seqidno.61、seqidno.65。

进一步,所述中和抗体或其抗原结合片段的重链可变区的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.46、seqidno.48、seqidno.50或seqidno.52;轻链可变区的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.47、seqidno.49、seqidno.51或seqidno.53。

优选的,所述中和抗体或其抗原结合片段的重链可变区的核酸序列为seqidno.46,轻链可变区的核酸序列seqidno.47;或中和抗体的重链可变区的核酸序列为seqidno.48,轻链可变区的核酸序列seqidno.49;中和抗体的重链可变区的核酸序列为seqidno.50,轻链可变区的核酸序列seqidno.51;中和抗体的重链可变区的核酸序列为seqidno.52,轻链可变区的核酸序列seqidno.53。

本发明还提供了一种重组载体,所述重组载体包含前面所述的核酸分子,此外,还包括与所述核酸分子序列操作性相连的表达调控序列。

本发明中“载体”一词指的是,可将编码某蛋白的多聚核苷酸插入其中并使蛋白获得表达的一种核酸运载工具。载体可通过转化、转导或转染宿主细胞,使其携带的遗传物质元件在宿主细胞内得以表达。举例来说,载体包括:质粒;噬菌粒;柯斯质粒;人工染色体如酵母人工染色体(yac)、细菌人工染色体(bac)或p1来源的人工染色体(pac);噬菌体如λ噬菌体或m13噬菌体及动物病毒等。用作载体的动物病毒种类有逆转录病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如sv40)。一种载体可能含有多种控制表达的元件,包括启动子序列、转录起始序列、增强子序列、选择元件及报告基因。另外,载体还可含有复制起始位点。载体还有可能包括协助其进入细胞的成分,如病毒颗粒、脂质体或蛋白外壳,但不仅仅只有这些物质。

本发明还提供了一种重组细胞,所述重组细胞中导入了前面所述的核酸分子或转染了前面所述的重组载体。

本发明中“重组细胞”一词指的是导入核酸分子或载体的细胞,包括如下许多细胞类型,如大肠杆菌或枯草菌等原核细胞,如酵母细胞或曲霉菌等真菌细胞,如s2果蝇细胞或sf9等昆虫细胞,或者如纤维原细胞,cho细胞,cos细胞,nso细胞,hela细胞,bhk细胞,hek293细胞或人细胞的动物细胞。

本发明还提供了一种利用前面所述的重组细胞产生抗体或抗原结合片段的方法,所述方法包括在合适的条件下培养前面所述的重组细胞并回收所述抗体。

本发明还提供了一种通过上述方法产生的抗体或抗原结合片段。

本发明还提供了一种检测用的产品,所述产品包括本发明前面所述的中和抗体或其抗原结合片段。

所述检测用的产品包括但不限于检测试剂、试剂盒、芯片或试纸。凡是能够检测出sars-cov-2-s的产品均包括在本发明的范围之内。

本发明还提供了一种药物组合物,所述药物组合物包括治疗有效量的本发明的前面所述的中和抗体或其抗原结合片段。

进一步,所述药物组合物还包括可药用载体或稀释剂。可以用任何适当的药用载体施用根据本发明的药物组合物用于治疗。

用于肠胃外给药和局部给药时,本发明的药物组合物包括无菌水或非水溶剂、悬液和乳剂。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油、鱼油、和可注射的有机酯。水性载体包括水、水-乙醇溶液,其中包括盐和缓冲的一般肠胃外载体,其包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖溶液、葡萄糖加氯化钠溶液、含有乳糖的林格氏液、或非挥发性油。静脉载体包括流体和营养补充剂、电解质补充剂,如那些基于林格氏葡萄糖等的电解质补充剂。组合物可能包括其它赋形剂,如稳定化试剂或防腐剂。实用的稳定赋形剂包括表面活性剂(聚山梨酯20&80、泊咯沙姆407)、聚合物(聚乙二醇,聚乙烯吡咯酮)、糖类(蔗糖、甘露醇、葡萄糖、乳糖)、醇(山梨醇,甘油丙二醇,乙二醇)、适当的蛋白质(白蛋白)、合适的氨基酸(甘氨酸,谷氨酸)、脂肪酸(乙醇胺)、抗氧化剂(抗坏血酸,半胱氨酸等)、螯合剂(edta盐类、组氨酸、天门冬氨酸)或金属离子(钙、镍、镁、锰)。有用的防腐剂有苯甲醇、氯代丁醇、苯扎氯铵,也可使用对羟基苯甲酸酯类。

可以以浓缩的形式或者以粉末的形式以根据需要重构提供根据本发明的药物组合物。这样的粉剂可以使用上述赋形剂。在冷冻干燥的情况下,某些冷冻保护剂是优选的,其包括聚合物(聚乙烯吡咯酮、聚乙二醇、葡聚糖)、糖(蔗糖、葡萄糖、乳糖)、氨基酸(甘氨酸、精氨酸、谷氨酸)和白蛋白。

本发明还提供了前面所述的中和抗体或其抗原结合片段的用途,所述用途包括以下任一项:

(1)在制备前面所述的检测产品中的应用;

(2)在制备前面所述的药物组合物中的应用;

(3)在制备中和sars-cov-2毒力的药物中的应用;

(4)在制备抗sars-cov-2感染的药物中的应用;

(5)在制备治疗由sars-cov-2感染导致的疾病的药物中的应用。

本发明还提供了前面所述的药物组合物的用途,所述用途包括以下任一项:

(1)在制备中和sars-cov-2毒力的药物中的应用;

(2)在制备抗sars-cov-2感染的药物中的应用;

(3)在制备治疗由sars-cov-2感染导致的疾病的药物中的应用。

本发明前面所述的中和抗体或其抗原结合片段可以以化学方法或者通过基因工程与其他因子缀合。这些因子提供将抗体靶向所需功能位点的作用或者为抗体提高或提供其他性能。

根据本发明的中和抗体可以以化学方法或者通过基因工程标记,以提供可检测的抗体。

本发明的“治疗”意在包括为受治疗者施用特异性结合sars-cov-2的抗体,其目的包括改善、治疗疾病。

本发明的“治疗有效量”是指对疾病的有害影响至少有所改善的水平。本领域技术人员能很容易地确定本发明的单克隆抗体的给药量和方案。

本发明的优点和有益效果:

本发明提供了一种新的治疗新冠肺炎的单克隆抗体,该抗体以病毒的sars-cov-2-s蛋白为靶标,具有亲和力和中和能力高,可实现生产标准化,质量控制简单等竞争优势。

附图说明

图1为phage-elisa鉴定抗sars-cov-2-s蛋白单链抗体的结合特异性图;

图2为候选抗体的微量中和实验结果图。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。本领域技术人员将会理解,下面的实施例仅用于说明本发明,而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者,按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考j.萨姆布鲁克等著,黄培堂等译的《分子克隆实验指南》,第三版,科学出版社)或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市购获得的常规产品。

实施例1病毒的培养及材料准备

sars-cov-2病毒为专利申请者于2020年在一名江苏病人急性期外周血中分离获得。该病毒接种vero细胞后,于37℃、5%co2的条件下培养5天,收集上清液并测定50%组织感染量(50%tissuecultureinfectivedose,tcid50)。所有操作均在bsl-3实验室中进行。

重组s蛋白(sars-cov-2-s),商业购买,序列见seqidno.1。

实施例2scfv人源抗体文库构建和抗sars-cov-2-s蛋白单链抗体的筛选

2.1材料

引物:根据《phagedisplay》一书设计家族特异性轻链(vκ和vλ)、igg重链(vh)和overlap-pcr引物,其中vκ12对、vλ24对、vh6对、overlap-pcr1对。

构建人源性单链抗体文库的引物:

vκforwardprimers:

5'gggcccaggcggccgagctccagatgacccagtctcc3'(seqidno.66)

5'gggcccaggcggccgagctcgtgatgacycagtctcc3'(seqidno.67)

5'gggcccaggcggccgagctcgtgwtgacrcagctcc3'(seqidno.68)

vκreverseprimers:

5'ggaagatctagaggaaccacctttgatytccaccttggtccc3'(seqidno.69)

5'ggaagatctagaggaaccacctttgatctccagcttggtccc3'(seqidno.70)

5'ggaagatctagaggaaccacctttaatctccagtcgtgtccc3'(seqidno.71)

5'ggaagatctagaggaaccacctttgatatccactttggtccc3'(seqidno.72)

vλforwardprimers:

5'gggcccaggcggccgagctcgtgbtgacgcagccgccctc3’(seqidno.73)

5'gggcccaggcggccgagctcgtgctgactcagccaccctc3’(seqidno.74)

5'gggcccaggcggccgagctcgccctgactcagcctccctccgt3’(seqidno.75)

5'gggcccaggcggccgagctcgtgctgactcaatcgccctc3’(seqidno.76)

5'gggcccaggcggccgagctcatgctgactcagccccactc3’(seqidno.77)

5'gggcccaggcggccgagctcgtggtgacycaggagccmtc3’(seqidno.78)

5'gggcccaggcggccgagctcgtgctgactcagccaccttc3’(seqidno.79)

5'gggcccaggcggccgagctcgggcagactcagcagctctc3’(seqidno.80)

vλreverseprimers:

5'ggaagatctagaggaaccaccgcctaggacggtcascttggts3’(seqidno.81)

5'ggaagatctagaggaaccaccgcctaaaatgatcagctgggtt3’(seqidno.82)

5'ggaagatctagaggaaccaccgccgaggacggtcagctsggts3’(seqidno.83)

vhforwardprimers:

5’ggtggttcctctagatcttcctcctctggggcggtggctcgggc3'(seqidno.84)

5’ggtggttcctctagatcttcctcctctggtggcggtggctcggg3'(seqidno.85)

5’ggtggttcctctagatcttcctcctctgtggcggtggctcgggc3’(seqidno.86)

5’ggtggttcctctgatcttcctcctcggtggcggtggctcgggcg3’(seqidno.87)

5’ggtggttcctctagatcttcctcctctggtggcggtggctcggc3’(seqidno.88)

5’ggtggttcctctagatcttcctcctctggtggcggtggtcgggc3’(seqidno.89)

vhreverseprimers:

5'cctggccggcctggccactagtgaccgatgggcccttggtggar3'(seqidno.90)

overlap-pcrforwardprimers:

5'gaggaggaggaggaggaggcggggcccaggcggccgagctc3’(seqidno.91)

overlap-pcrreverseprimers:

5'gaggaggaggaggaggagcctggccggcctggccactagtg3’(seqidno.92)

2.2方法

2.2.1外周血淋巴细胞的分离及总rna提取

将2名covid-19患者恢复期外周血分别与等量的生理盐水混合后按照淋巴细胞分离液说明书吸取单个核细胞,生理盐水洗涤三次后参照总rna抽提试剂盒说明书抽提rna。

2.2.2抗体可变区基因的pcr扩增

将抽提的2份总rna混合后反转录出cdna第一链,反转录条件如下:55℃30min,85℃5min,4℃30min。再以cdna为模板pcr扩增人源性抗体vκ、vλ和vh基因,pcr反应条件为:94℃预变性10min,然后94℃20s,57℃45s,72℃1min,25个循环,最后72℃延伸20min,凝胶电泳并切胶纯化回收。

2.2.3scfv基因的拼接

将纯化的vκ基因片段与vλ基因片段等摩尔混合后再与vh基因片段等量混合,利用overlap-pcr拼接scfv基因,overlap-pcr反应条件为:94℃预变性10min,然后94℃20s,57℃45s,72℃1min,25个循环,最后72℃延伸20min,凝胶电泳并切胶纯化回收。

2.2.4噬菌体单链抗体文库的构建及质量鉴定

纯化后的scfv基因与pcomb3xss质粒分别经sfii酶切,连接胶纯化回收后的目的片段,转入感受态大肠杆菌xl1-blue,加入20ml2yt培养液中37℃培养45min后离心,沉淀涂于2yt平板30℃过夜培养。次日将平板上生长的菌苔全部收集于2yt培养基中,37℃培养至od600为0.8。加入终浓度为1×109pfu/ml的辅助噬菌体vcsm1337℃培养1h。加入终浓度为50μg/ml的卡纳霉素,37℃继续培养8h,900g离心20min弃沉淀,于上清中加入5×peg/nacl,混匀后置于冰上6h,900g离心45min,把沉淀重悬于3ml的pbs中,过0.22μm的滤膜,滤液即为人源性噬菌体单链抗体文库,同时计算文库库容和多样性。

2.2.5抗sars-cov-2-s蛋白特异性单链抗体的筛选

取200μl扩增后的噬菌体文库与固相化包被的sars-cov-2-s蛋白共同孵育,进行4轮“吸附-洗脱-扩增”亲和筛选,取第4轮洗脱液感染对数生长期的大肠杆菌xl1-blue后,涂布2×yt培养板,37℃培养过夜,随机挑取200个单菌落分别接种96孔深孔板(含100μg/ml氨苄青霉素、12.5μg/ml四环素和1g/ml葡萄糖),37℃过夜振摇培养,次日1:10分别接种到新96孔深孔板(含100μg/ml氨苄青霉素和30μg/ml四环素)中37℃振摇培养6h,加入辅助噬菌体vcsm13(终浓度为1×109pfu/ml),37℃孵育1h,加入卡纳霉素(终浓度为50μg/ml)30℃过夜振摇培养制备成噬菌体单链抗体,用0.1μg/孔sars-cov-2-s蛋白包被酶标板,二抗是用pbs缓冲液(含5g/ml脱脂奶粉)按1:2000稀释的hrp标记抗m13抗体,进行phage-elisa鉴定并测定od450值,当positive/negative≥2.1时定为阳性,阳性克隆的菌液送商业公司测序。

2.3结果

抗sars-cov-2-s蛋白单链抗体的筛选

以sars-cov-2-s蛋白为抗原对人源化sars-cov-2病毒单链抗体文库进行了4轮亲和筛选,抗sars-cov-2-s蛋白特异性单链抗体得到了选择性富集,产出/投入比值提高了近30倍(表1)。随机挑取200个噬菌体单克隆进行phage-elisa试验并测定od450值,结果显示有43个单链抗体与sars-cov-2-s蛋白能特异性结合(图1)。43个阳性克隆菌液经测序分析,获得15种不同氨基酸序列的scfv抗体,分别命名为b11、1tb2、g6、d4、c7、b8、e12、h1、f11、g10、b10、h2、g8、a7和d5。

表1亲和筛选对抗sars-cov-2-s蛋白特异性scfv抗体的富集效应

实施例3候选scfv单抗克隆微量中和实验(所有操作均在bsl-3实验室中进行)

3.1噬菌体抗体的制备

分别挑取phage-elisa实验阳性的15种单菌落至2ml2×yt培养基(含100μg/ml氨苄青霉素、12.5μg/ml四环素和1g/ml葡萄糖)中,37℃过夜振摇培养,次日1:10分别接种到10ml2×yt培养基(含100μg/ml氨苄青霉素和30μg/ml四环素)中37℃振摇培养6h,加入辅助噬菌体vcsm13(终浓度为1×109pfu/ml),37℃孵育1h,加入卡纳霉素(终浓度为50μg/ml)30℃过夜振摇培养后900g离心30分钟,弃沉淀,于上清中加入5×peg/nacl,混匀后置于冰上6小时,900g离心30min,弃上清,用1mlpbs重悬沉淀后900g离心30min,将上清加入透析袋中在pbs缓冲液中透析3天过0.22μm的滤膜后4℃保存。

3.2微量中和实验操作

(1)vero细胞接种于96孔板,培养至对数生长期。

(2)将5tcid50病毒(共50μl)与等体积噬菌体抗体混匀,37°孵育1h。

(3)把抗原抗体复合物100μl加入细胞培养孔中,设置复孔,同时设置阳性对照组(康复期病人血清)、阴性对照组(2×yt培养基)和空白对照组(只有细胞,没有病毒)。

(4)细胞培养物置于37℃、5%co2的培养箱中培养5天,每天观察细胞病变(cytopathiceffect,cpe)。对于能抑制大于50%cpe出现的单抗被认为具有中和抑制作用。

3.3结果

微量中和实验

实验结果显示,15种scfv单抗中b8、b10、c7、g10对sars-cov-2-s病毒具有很好的中和抑制作用(图2),经测序获得b8、b10、c7、g10抗体的序列,具体如下:

b8抗体重链可变区的氨基酸序列如seqidno.26,核酸序列如seqidno.46所示;重链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.2,核酸序列如seqidno.34所示;重链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.6,核酸序列如seqidno.38所示;重链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.10,核酸序列如seqidno.42所示;轻链可变区的氨基酸序列如seqidno.27,核酸序列如seqidno.47所示;轻链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.14,核酸序列如seqidno.54所示;轻链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.18,核酸序列如seqidno.58所示;轻链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.22,核酸序列如seqidno.62所示。

b10抗体重链可变区的氨基酸序列如seqidno.28,核酸序列如seqidno.48所示;重链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.3,核酸序列如seqidno.35所示;重链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.7,核酸序列如seqidno.39所示;重链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.11,核酸序列如seqidno.43所示;轻链可变区的氨基酸序列如seqidno.29,核酸序列如seqidno.49所示;轻链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.15,核酸序列如seqidno.55所示;轻链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.19,核酸序列如seqidno.59所示;轻链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.23,核酸序列如seqidno.63所示。

c7抗体重链可变区的氨基酸序列如seqidno.30,核酸序列如seqidno.50所示;重链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.4,核酸序列如seqidno.36所示;重链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.8,核酸序列如seqidno.40所示;重链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.12,核酸序列如seqidno.44所示;轻链可变区的氨基酸序列如seqidno.31,核酸序列如seqidno.51所示;轻链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.16,核酸序列如seqidno.56所示;轻链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.20,核酸序列如seqidno.60所示;轻链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.24,核酸序列如seqidno.64所示。

g10抗体重链可变区的氨基酸序列如seqidno.32,核酸序列如seqidno.52所示;重链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.5,核酸序列如seqidno.37所示;重链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.9,核酸序列如seqidno.41所示;重链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.13,核酸序列如seqidno.45所示;轻链可变区的氨基酸序列如seqidno.33,核酸序列如seqidno.53所示;轻链可变区cdr1的氨基酸序列如seqidno.17,核酸序列如seqidno.57所示;轻链可变区cdr2的氨基酸序列如seqidno.21,核酸序列如seqidno.61所示;轻链可变区cdr3的氨基酸序列如seqidno.25,核酸序列如seqidno.65所示。

虽然以上仅描述了本发明的具体实施方式范例,但是本领域的技术人员应当理解,这些仅是举例说明,本发明的保护范围是由所附权利要求书限定的。本领域的技术人员在不背离本发明的原理和实质的前提下,可以对这些实施方式做出多种变更或修改,但这些变更或修改均落入本发明的保护范围。

序列表

<110>江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院)

<120>sars-cov-2抑制剂及其应用

<160>92

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>693

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>1

metpheleuleuthrthrlysargthrmetphevalpheleuvalleu

151015

leuproleuvalserserglncysvalasnleuthrthrargthrgln

202530

leuproproalatyrthrasnserphethrargglyvaltyrtyrpro

354045

asplysvalpheargserservalleuhisserthrglnaspleuphe

505560

leuprophepheserasnvalthrtrpphehisalailehisvalser

65707580

glythrasnglythrlysargpheaspasnprovalleupropheasn

859095

aspglyvaltyrphealaserthrglulysserasnileilearggly

100105110

trpilepheglythrthrleuaspserlysthrglnserleuleuile

115120125

valasnasnalathrasnvalvalilelysvalcysglupheglnphe

130135140

cysasnasppropheleuglyvaltyrtyrhislysasnasnlysser

145150155160

trpmetgluserglupheargvaltyrserseralaasnasncysthr

165170175

pheglutyrvalserglnpropheleumetaspleugluglylysgln

180185190

glyasnphelysasnleuarggluphevalphelysasnileaspgly

195200205

tyrphelysiletyrserlyshisthrproileasnleuvalargasp

210215220

leuproglnglypheseralaleugluproleuvalaspleuproile

225230235240

glyileasnilethrargpheglnthrleuleualaleuhisargser

245250255

tyrleuthrproglyaspserserserglytrpthralaglyalaala

260265270

alatyrtyrvalglytyrleuglnproargthrpheleuleulystyr

275280285

asngluasnglythrilethraspalavalaspcysalaleuasppro

290295300

leusergluthrlyscysthrleulysserphethrvalglulysgly

305310315320

iletyrglnthrserasnpheargvalglnprothrgluserileval

325330335

argpheproasnilethrasnleucyspropheglygluvalpheasn

340345350

alathrargphealaservaltyralatrpasnarglysargileser

355360365

asncysvalalaasptyrservalleutyrasnseralaserpheser

370375380

thrphelyscystyrglyvalserprothrlysleuasnaspleucys

385390395400

phethrasnvaltyralaaspserphevalileargglyaspgluval

405410415

argglnilealaproglyglnthrglylysilealaasptyrasntyr

420425430

lysleuproaspaspphethrglycysvalilealatrpasnserasn

435440445

asnleuaspserlysvalglyglyasntyrasntyrleutyrargleu

450455460

phearglysserasnleulysprophegluargaspileserthrglu

465470475480

iletyrglnalaglyserthrprocysasnglyvalgluglypheasn

485490495

cystyrpheproleuglnsertyrglypheglnprothrasnglyval

500505510

glytyrglnprotyrargvalvalvalleuserphegluleuleuhis

515520525

alaproalathrvalcysglyprolyslysserthrasnleuvallys

530535540

asnlyscysvalasnpheasnpheasnglyleuthrglythrglyval

545550555560

leuthrgluserasnlyslyspheleupropheglnglnpheglyarg

565570575

aspilealaaspthrthraspalavalargaspproglnthrleuglu

580585590

ileleuaspilethrprocysserpheglyglyvalservalilethr

595600605

proglythrasnthrserasnglnvalalavalleutyrglnaspval

610615620

asncysthrgluvalprovalalailehisalaaspglnleuthrpro

625630635640

thrtrpargvaltyrserthrglyserasnvalpheglnthrargala

645650655

glycysleuileglyalagluhisvalasnasnsertyrglucysasp

660665670

ileproileglyalaglyilecysalasertyrglnthrglnthrasn

675680685

serproargargala

690

<210>2

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>2

glyleuasnpheglythrserval

15

<210>3

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>3

glyphethrpheserserserala

15

<210>4

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>4

glyphethrphealaasptyrthr

15

<210>5

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>5

glypheasnphesersertyrala

15

<210>6

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>6

ileaspserglyglythrserile

15

<210>7

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>7

ileargserlysproasnsertyralathr

1510

<210>8

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>8

ileargserlysthrtyrglyglythrala

1510

<210>9

<211>8

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>9

ileserseraspglyservalthr

15

<210>10

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>10

serthraspserglyserileglygluphe

1510

<210>11

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>11

thrservalcysserglyglysercystyrgln

1510

<210>12

<211>17

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>12

thrargileserglytyrtyrglyalaglyserglyglyalametasp

151015

val

<210>13

<211>11

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>13

alaargserglytrpaspaspalapheaspile

1510

<210>14

<211>6

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>14

glnasnileargglytyr

15

<210>15

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>15

argasnvalleutyrserproasnasnlysasntyr

1510

<210>16

<211>7

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>16

glnservalsersersertyr

15

<210>17

<211>6

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>17

asnileglyarglystyr

15

<210>18

<211>3

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>18

hisalaser

1

<210>19

<211>3

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>19

trpalaser

1

<210>20

<211>3

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>20

aspalaser

1

<210>21

<211>3

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>21

aspasnasp

1

<210>22

<211>10

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>22

glnglnserhisaspthrleuthrtrpthr

1510

<210>23

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>23

hisglntyrpheserthrleutrpthr

15

<210>24

<211>9

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>24

glnglnargserasntrpproleuthr

15

<210>25

<211>12

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>25

glnvaltrpaspthrthrtyrserargprovalile

1510

<210>26

<211>132

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>26

gluvallysleuleugluserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysthralaserglyleuasnpheglythrser

202530

valmethistrpvalargglnvalglnglythrglyleuleutrpval

354045

serargileaspserglyglythrserilethrtyralaaspserval

505560

argglyargphethrvalserargaspasnalalysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetasnserleuargvalgluaspthrglyvaltyrtyrcys

859095

serthraspserglyserileglygluphetrpglyglnglythrleu

100105110

valthrvalserseralaserprothrserprolysvalthrsergly

115120125

glnalaglygln

130

<210>27

<211>108

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>27

gluleuglnmetthrglnserproserproleuseralaservalgly

151015

aspargvalthrilethrcysargalaglyglnasnileargglytyr

202530

valasntrptyrglnhislysalaglyglualaprolysleuleuile

354045

tyrhisalaserasnleuglnserglyleuproleuargphesergly

505560

serglyserglythraspphethrleuthrilethrserleuglnpro

65707580

gluaspphealailetyrtyrcysglnglnserhisaspthrleuthr

859095

trpthrpheglyglnglythrlysvalgluilelys

100105

<210>28

<211>135

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>28

glnvalglnleuglngluserglyglyglyleuvalglnproglyglu

151015

serleulysleusercysalaalaserglyphethrpheserserser

202530

alamethistrpvalargglnalaserglylysglyleuglutrpile

354045

glyargileargserlysproasnsertyralathralatyralaala

505560

servalthrglyargphethrileserargaspaspserlysasnthr

65707580

alatyrleuglnmetasnserleulysthrgluaspthralavaltyr

859095

tyrcysthrservalcysserglyglysercystyrglntrpglygln

100105110

glythrleuvalthrvalserseralaserprothrserprolysval

115120125

thrserglyglnalaglygln

130135

<210>29

<211>113

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>29

gluleuvalmetthrglnserproaspserleualavalserleugly

151015

gluargalathrileasncyslysserserargasnvalleutyrser

202530

proasnasnlysasntyrleuglytrptyrglnglnlysproglygln

354045

proprolysleuleuiletyrtrpalaserserarggluserglyval

505560

proaspargpheserglyserglysergluthraspphethrleuthr

65707580

ileserserleuglnalagluaspvalalavaltyrtyrcyshisgln

859095

tyrpheserthrleutrpthrpheglyglnglythrlysvalgluile

100105110

lys

<210>30

<211>126

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>30

gluvalglnleuvalgluserglyglyglyleuvalmetproglyarg

151015

serleuargleusercysarghisserglyphethrphealaasptyr

202530

thrmetasntrppheargglnvalproglylysglyleuglutrpile

354045

glypheileargserlysthrtyrglyglythralaglutyralaala

505560

servallysglyargphethrileserargaspaspserlysserile

65707580

alatyrleuglumetasnserleuasnthrgluaspthrglyvaltyr

859095

argcysthrargileserglytyrtyrglyalaglyserglyglyala

100105110

metaspvaltrpglyglnglythrthrvalthrvalserser

115120125

<210>31

<211>108

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>31

gluleuvalleuthrglnserproglythrleuserleuserprogly

151015

gluargalathrleusertyrargalaserglnservalserserser

202530

tyrleualatrptyrglnglnlysproglyglnalaproargleuleu

354045

iletyraspalaserasnargalathrglyileproalaargpheser

505560

glyserglyserglythraspphethrleuthrileserserleuglu

65707580

progluaspphealavaltyrtyrcysglnglnargserasntrppro

859095

leuthrpheglyproglythrlysvalaspilelys

100105

<210>32

<211>118

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>32

gluvalglnleuvalglnserglyglyglyleuvalglnproglygly

151015

serleuargleusercysalaalaserglypheasnphesersertyr

202530

alamethistrpvalargglnalaproglylysglyproglutrpval

354045

alaleuileserseraspglyservalthrtyrphethraspserval

505560

lysglyargphethrileserargaspasnserlysasnthrleutyr

65707580

leuglnmetasnserleuargalagluaspthralavaltyrtyrcys

859095

alaargserglytrpaspaspalapheaspiletrpglyglnglythr

100105110

metvalthrvalserser

115

<210>33

<211>110

<212>prt

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>33

serglnservalleuthrglnproprosermetserleualaprogly

151015

glnthralathrilethrcysalaglythrasnileglyarglystyr

202530

valhistrptyrglnglnargproglyglnalaprovalleuvalmet

354045

seraspasnaspaspargproserglyileprogluargpheserala

505560

serasnserglyhisthralathrleuileileasnargvalgluval

65707580

aspaspglualaasptyrtyrcysglnvaltrpaspthrthrtyrser

859095

argprovalilepheglyglyglythrlysleuthrvalleu

100105110

<210>34

<211>24

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>34

ggattaaacttcggtacttctgta24

<210>35

<211>24

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>35

gggttcaccttcagtagctctgct24

<210>36

<211>24

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>36

ggattcacgtttgctgattacact24

<210>37

<211>24

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>37

ggattcaatttcagtagctatgct24

<210>38

<211>24

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>38

attgatagtggagggactagtata24

<210>39

<211>30

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>39

attagaagcaaacctaacagttacgcgaca30

<210>40

<211>30

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>40

attagaagcaaaacttatggtgggacagca30

<210>41

<211>24

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>41

atatcctctgatgggagtgttaca24

<210>42

<211>30

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>42

tccaccgattctgggtcgatcggagaattc30

<210>43

<211>33

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>43

acatctgtttgtagtggtggtagctgctaccaa33

<210>44

<211>51

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>44

actaggatatctggctactatggtgcggggtcgggcggggctatggacgtc51

<210>45

<211>33

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>45

gcgagatctgggtgggacgatgcttttgatatc33

<210>46

<211>396

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>46

gaggtgaagctgttggagtctgggggcggcttagttcagcctggggggtccctgagactc60

tcctgtacagcctctggattaaacttcggtacttctgtaatgcattgggtccgccaagtt120

caagggacggggctgctgtgggtctcacgtattgatagtggagggactagtataacctac180

gcggactccgtgaggggccgattcaccgtctccagagacaacgccaagaacacactgtat240

ctgcaaatgaacagtctgagagtcgaggacacgggtgtgtattactgctccaccgattct300

gggtcgatcggagaattctggggccagggaaccctggtcaccgtgtcctcggcatccccg360

accagccccaaggtcactagtggccaggccggccag396

<210>47

<211>324

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>47

gagctccagatgacccagtctccatcgcccctgtctgcatctgtcggagacagagtcacc60

atcacttgccgggcaggtcagaacattcgcggttatgtaaattggtatcagcacaaagca120

ggggaagcccctaagctcctgatctatcatgcctctaatttgcaaagtggactcccgtta180

agattcagtggcagtggatcagggacagatttcactctcaccatcaccagtctgcaacct240

gaagattttgcaatttactactgtcaacagagtcacgacacccttacgtggacgttcggc300

caagggaccaaggtggagatcaaa324

<210>48

<211>405

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>48

caggtgcagctgcaggagtcggggggaggcttggtccagcctggggaatccctgaaactc60

tcctgtgcagcctctgggttcaccttcagtagctctgctatgcactgggtccgccaggct120

tccgggaaagggctggagtggattggccgtattagaagcaaacctaacagttacgcgaca180

gcatatgctgcgtcggtgacaggcaggttcaccatctccagagatgattcaaagaacacg240

gcgtatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacacggccgtgtattattgtacatct300

gtttgtagtggtggtagctgctaccaatggggccagggaaccctggtcaccgtctcctca360

gcatccccgaccagccccaaggtcactagtggccaggccggccag405

<210>49

<211>339

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>49

gagctcgtgatgactcagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccacc60

atcaactgcaagtccagccggaatgttttatacagtcccaataataagaactacttaggt120

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<210>50

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<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>50

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<211>324

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>51

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<213>人工序列(artificialsequence)

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<211>330

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

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<210>71

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<213>人工序列(artificialsequence)

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gaggaggaggaggaggagcctggccggcctggccactagtg41


技术特征:

1.一种针对sars-cov-2病毒的中和抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述抗体或其抗原结合片段以病毒的sars-cov-2-s蛋白为靶标,sars-cov-2-s蛋白的序列为seqidno.1。

2.根据权利要求1所述的中和抗体或其抗原结合片段,中和抗体或其抗原结合片段包括轻链cdr1、轻链cdr2、轻链cdr3、重链cdr1、重链cdr2和重链cdr3;其特征在于,

重链cdr1的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.2、seqidno.3、seqidno.4或seqidno.5;

重链cdr2的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.6、seqidno.7、seqidno.8或seqidno.9;

重链cdr3的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.10、seqidno.11、seqidno.12或seqidno.13;

轻链cdr1的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.14、seqidno.15、seqidno.16或seqidno.17;

轻链cdr2的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.18、seqidno.19、seqidno.20或seqidno.21;

轻链cdr3的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.22、seqidno.23、seqidno.24或seqidno.25。

3.根据权利要求1所述的中和抗体或其抗原结合片段,其特征在于,所述中和抗体或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.26、seqidno.28、seqidno.30或seqidno.32;轻链可变区的氨基酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.27、seqidno.29、seqidno.31或seqidno.33。

4.编码权利要求2或3所述的中和抗体或其抗原结合片段的核酸分子。

5.根据权利要求4所述的核酸分子,其特征在于,编码重链cdr1的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.34、seqidno.35、seqidno.36或seqidno.37;

编码重链cdr2的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.38、seqidno.39、seqidno.40或seqidno.41;

编码重链cdr3的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.42、seqidno.43、seqidno.44或seqidno.45;

编码轻链cdr1的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.54、seqidno.55、seqidno.56或seqidno.57;

编码轻链cdr2的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.58、seqidno.59、seqidno.60或seqidno.61;

编码轻链cdr3的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.62、seqidno.63、seqidno.64或seqidno.65;

或中和抗体或其抗原结合片段的重链可变区的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.46、seqidno.48、seqidno.50或seqidno.52;

轻链可变区的核酸序列选自下列序列中的一种:seqidno.47、seqidno.49、seqidno.51或seqidno.53。

6.一种重组载体,其特征在于,所述重组载体包括权利要求4或5所述的核酸分子。

7.一种重组细胞,其特征在于,所述重组细胞中导入了权利要求4或5所述的核酸分子,或转染了权利要求6所述的重组载体。

8.一种药物组合物,其特征在于,所述药物组合物包括治疗有效量的权利要求1所述的中和抗体或其抗原结合片段。

9.一种检测sars-cov-2病毒的产品,其特征在于,所述产品包括权利要求1所述的中和抗体或其抗原结合片段。

10.权利要求1所述的中和抗体或其抗原结合片段的应用,所述应用包括以下任一项:

(1)在制备权利要求9所述的产品中的应用;

(2)在制备权利要求8所述的药物组合物中的应用;

(3)在制备中和sars-cov-2毒力的药物中的应用;

(4)在制备抗sars-cov-2感染的药物中的应用;

(5)在制备治疗由sars-cov-2感染导致的疾病的药物中的应用。

技术总结
本发明涉及SARS‑CoV‑2抑制剂及其应用,具体涉及一种针对SARS‑CoV‑2的中和抗体及其应用。本发明采用噬菌体展示技术,构建了一个高容量的人源免疫性噬菌体抗体文库,并以SARS‑CoV‑2‑S蛋白为靶标,筛选人源抗体单链抗体片段并获得了对SARS‑CoV‑2病毒有较强的中和作用的抗体。本发明的抗体可以用于治疗新型冠状病毒感染引起的疾病,具有重要的临床应用价值。

技术研发人员:张文帅;郭喜玲;焦永军;曾晓燕;朱凤才;朱宝立
受保护的技术使用者:江苏省疾病预防控制中心(江苏省公共卫生研究院)
技术研发日:2020.03.03
技术公布日:2020.06.26

介绍SARS的相关内容如下:

标题:介绍SARS|http://www.wc10086.cn/327058.html

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