最新降碳倍半萜类化合物、制备方法及作为抗肿瘤药物的应用与流程

这里写的最新降碳倍半萜类化合物、制备方法及作为抗肿瘤药物的应用与流程,小编带大家了解一下 。

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本发明涉及一种倍半萜类化合物,尤其是一种降碳倍半萜类化合物、制备方法及作为抗肿瘤药物的应用。



背景技术:

中药吴茱萸为芸香科(rutaceae)吴茱萸属(tetradium)植物吴茱萸evodiarutaecarpa(juss.)benth.、石虎evodiarutaecarpa(juss.)benth.var.officinalis(dode)huang或疏毛吴茱萸evodiarutaecarpa(juss.)benth.var.bodinieri(dode)huang的干燥近成熟果实。根据《神农本草经》记载,吴茱萸具有味苦、辛温、有小毒等特性,归肝、脾、胃、肾经,具有助阳止泻、温中止痛、降逆止呕、散寒止痛等功,临床上常用于寒凝疼痛、胃寒呕吐、虚寒泄泻等症状的治疗。目前,虽然已有以吴茱萸为原料提取抗肿瘤活性成份的相关报道,但是并未有其抗肿瘤活性成份为降碳倍半萜类化合物的记载。



技术实现要素:

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题,提供一种降碳倍半萜类化合物、制备方法及作为抗肿瘤药物的应用。

本发明的技术解决方案是:一种降碳倍半萜类化合物,结构式如下:

一种上述降碳倍半萜类化合物的制备方法,按照如下步骤进行:

a.将吴茱萸近成熟果实粉碎,用质量浓度70%的乙醇加热回流提取三次,合并提取液,减压浓缩并回收乙醇,得吴茱萸浸膏;将吴茱萸浸膏用水分散,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇多次等体积萃取,分别减压浓缩得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及正丁醇萃取物;

b.将乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析,采用石油醚-乙酸乙酯按50:1,30:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,1:2梯度洗脱;

c.合并石油醚-乙酸乙酯20:1至5:1洗脱流份;

d.将所得洗脱流分经硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯按50:1,30:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,1:2梯度洗脱,每个梯度收集3个洗脱流份,每个洗脱流份为1l,将依次得到的24个洗脱流分分别记为n1~n24;

e.将洗脱流份n6经反相ods中压柱色谱分离,以甲醇-水梯度洗脱,流速15ml/min,洗脱6h,得到13个洗脱流份,每个洗脱流份为420ml,将依次得到的13个洗脱流份分别记为n6-1~n6-13;

f.将洗脱流份n6-5经反相半制备c18色谱柱hplc分离,甲醇:水=7:3,流速3.0ml/min,得到单体化合物,即降碳倍半萜类化合物。

所述降碳倍半萜类化合物作为抗肿瘤药物的应用。

所述降碳倍半萜类化合物作为抗肝癌、抗乳腺癌、抗肺癌、抗肾癌或抗骨髓神经母细胞瘤药物的应用。

本发明的降碳倍半萜类化合物是从中药吴茱萸中提取制备而成,对人肝癌细胞(hepg-2)、人乳腺癌细胞(mcf-7)、人肺癌细胞(a549)、人肾癌细胞(a498)和人骨髓神经母细胞瘤细胞(shsy-5y)细胞的增殖具有抑制作用,可应用于制备抗肿瘤药物。

附图说明

图1是本发明实施例化合物1的hresims谱图。

图2是本发明实施例化合物1的关键1h-1hcosy和hmbc相关图。

图3是本发明实施例化合物1的实验cd与计算ecd图。

图4是本发明实施例化合物1的x-射线单晶衍射图。

图5是本发明实施例化合物1的1hnmr谱图。

图6是本发明实施例化合物1的13cnmr谱图。

图7是本发明实施例化合物1的1h-1hcosy谱图。

图8是本发明实施例化合物1的hsqc谱图。

图9是本发明实施例化合物1的hmbc谱图。

具体实施方式

本发明的制备方法按照如下步骤进行:

a.将吴茱萸近成熟果实粉碎,用质量浓度70%的乙醇加热回流提取三次,合并提取液,减压浓缩并回收乙醇,得吴茱萸浸膏;将吴茱萸浸膏用水分散,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇多次等体积萃取,分别减压浓缩得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及正丁醇萃取物;

b.将乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析,采用石油醚-乙酸乙酯按50:1,30:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,1:2梯度洗脱,每个梯度收集32l;

c.合并石油醚-乙酸乙酯20:1至5:1洗脱流份;

d.将所得洗脱流分经硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯按50:1,30:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,1:2梯度洗脱,每个梯度收集3个洗脱流份,每个洗脱流份为1l,将依次得到的24个洗脱流分分别记为n1~n24;

e.将洗脱流份n6经反相ods中压柱色谱分离,以甲醇-水(10:90~90:10)梯度洗脱,流速15ml/min,洗脱6h,得到13个洗脱流份,每个洗脱流份为420ml,将依次得到的13个洗脱流份分别记为n6-1~n6-13;

f.将洗脱流份n6-5经反相半制备c18色谱柱hplc分离,甲醇:水=7:3,流速3.0ml/min,得到化合物1。

一.化合物的结构测定:

化合物1为白色结晶。

化合物1的hresims谱图、h-1hcosy和hmbc相关谱图、实验cd与计算ecd谱图、x-射线单晶衍射图、1hnmr谱图、13cnmr谱图、1h-1hcosy谱图、hsqc谱图及hmbc谱图分别如图1~图9所示。

化合物1的核磁共振氢谱和碳谱数据如表1所示。

表1

注:1h-nmr(600mhz,cd3od),13c-nmr(150mhz,cd3od)

根据[α]20d-111.2(c0.22,meoh),(+)-hr-esimsm/z247.0948[m+na]+(calcdforc12h16o4na,247.0941)结合核磁共振数据以及5个不饱和度确定其分子式为c12h16o4(图1)。化合物1的1hnmr谱显示存在两个末端双键质子[δh5.56(brs,h-10a)和5.46(brs,h-10b)],两个顺式双键质子[δh5.91(d,j=12.6hz,h-3)和6.75(d,j=12.6hz,h-4)],两个甲基质子[δh1.44(s,h-11)和1.48(s,h-12)],一个甲氧基质子[δh3.63(s,och3-9)],两个脂肪族亚甲基质子[δh2.83(dd,j=15.6,10.2hz,h-8a)和2.28(dd,j=15.6,3.6hz,h-8b)],一个脂肪族次甲基质子[δh3.16(ddd,j=10.2,3.6,1.2hz,h-6)](表1)。13cnmr谱显示存在12个碳信号,除了以上基团相对应的碳信号外,还存在三个sp2季碳信号[δc168.0(c-2),145.7(c-5)和173.8(c-9)],一个sp3连氧季碳信号[δc82.0.4(c-7)](表1)。以上波谱数据显示该化合物是一个特殊的降碳倍半萜,并通过2dnmr波谱数据分析对其结构进行了确定。根据hmbc谱中,h-4/c-2和c-6,h-3/c-5,h-8/c-4和c-6,h-8和och3-9/c-9异核相关信号,结合它们的化学位移以及5个不饱和度,确证化合物1结构中存在一个乙酸甲酯单元和一个α,β-不饱和七元内酯环,并且c-5和c-10形成末端双键(图2)。根据1h–1hcosy谱中h-6/h-8同核质子偶合相关信号以及hmbc谱中och3-9/c-9,h2-8/c-7,c-10和c-19,推断出乙酸甲酯单元与七元内酯环通过c-6相连。另外,h-11和h-12与c-4的hmbc相关信号,表明两个甲基连接在c-7上(图2)。化合物1预设为6r构型的计算ecd谱图与实验cd谱图相似,支持其c-6为r构型(图3)。化合物1经x-射线单晶衍射(cukα辐射)实验进一步确定其结构式如下所示(图4)

二.本发明实施例化合物1的抗肿瘤活性评价:

细胞活力测定:通过cck-8方法检测化合物1对人肝癌细胞(hepg-2),人乳腺癌细胞(mcf-7),人肺癌细胞(a549),人肾癌细胞(a498)和人骨髓神经母细胞瘤细胞(shsy-5y)细胞活力的影响。

具体方法如下:

将处于对数生长期的肿瘤细胞制成单细胞悬液,取5000个/孔接种于96孔板中。次日,将96孔板中培养基更换为含有不同药物(化合物1)浓度(1、5、20、50、100μm)的新鲜培养基,每组设置5个复孔,并设置空白对照;继续培养48h后,更换为100μl用无血清培养基配制的cck8溶液,孵育1~2h后,于450nm处测吸光值,并用graphpadprism6计算得到ic50值,如表2所示:

表2

从表2中可以看出,化合物1对人肝癌细胞(hepg-2),人乳腺癌细胞(mcf-7),人肺癌细胞(a549),人肾癌细胞(a498)和人骨髓神经母细胞瘤细胞(shsy-5y)细胞的增殖具有抑制作用。


技术特征:

1.一种降碳倍半萜类化合物,其特征在于结构式如下:

2.一种如权利要求1所述降碳倍半萜类化合物的制备方法,其特征在于按照如下步骤进行:

a.将吴茱萸近成熟果实粉碎,用质量浓度70%的乙醇加热回流提取三次,合并提取液,减压浓缩并回收乙醇,得吴茱萸浸膏;将吴茱萸浸膏用水分散,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇多次等体积萃取,分别减压浓缩得石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物及正丁醇萃取物;

b.将乙酸乙酯萃取物进行硅胶柱层析,采用石油醚-乙酸乙酯按50:1,30:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,1:2梯度洗脱;

c.合并石油醚-乙酸乙酯20:1至5:1洗脱流份;

d.将所得洗脱流分经硅胶柱层析,用石油醚-乙酸乙酯按50:1,30:1,20:1,10:1,5:1,2:1,1:1,1:2梯度洗脱,每个梯度收集3个洗脱流份,每个洗脱流份为1l,将依次得到的24个洗脱流分分别记为n1~n24;

e.将洗脱流份n6经反相ods中压柱色谱分离,以甲醇-水梯度洗脱,流速15ml/min,洗脱6h,得到13个洗脱流份,每个洗脱流份为420ml,将依次得到的13个洗脱流份分别记为n6-1~n6-13;

f.将洗脱流份n6-5经反相半制备c18色谱柱hplc分离,甲醇:水=7:3,流速3.0ml/min,得到单体化合物,即降碳倍半萜类化合物。

3.一种如权利要求1所述的降碳倍半萜类化合物作为抗肿瘤药物的应用。

4.根据权利要求3所述降碳倍半萜类化合物作为抗肿瘤药物的应用,其特征在于是作为抗肝癌、抗乳腺癌、抗肺癌、抗肾癌或抗骨髓神经母细胞瘤药物的应用。

技术总结
本发明公开一种降碳倍半萜类化合物,结构式如下:本发明的降碳倍半萜类化合物是从中药吴茱萸中提取制备而成,对人肝癌细胞(Hepg‑2)、人乳腺癌细胞(MCF‑7)、人肺癌细胞(A549)、人肾癌细胞(A498)和人骨髓神经母细胞瘤细胞(SHSY‑5Y)细胞的增殖具有抑制作用,可应用于制备抗肿瘤药物。

技术研发人员:李大伟;冷爱晶;李永杰;李连;王超;马骁驰
受保护的技术使用者:大连医科大学附属第一医院
技术研发日:2020.04.20
技术公布日:2020.06.26

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